LFU:online

Design und Durchführung von Experimenten um die Funktion von molekularen Maschinen in vivo und in vitro zu testen.

Am Beispiel der grundlegenden zellulären Maschinerie zum lysosomalen Abbau von Membranproteinen (ESCRT Maschinerie) studieren wir die Funktion einer molekularen Maschine (das Vps4 Protein), die die Energie aus der Hydrolyse von ATP in mechanische Energie umsetzt. Wir untersuchen die Funktion dieser molekularen Maschine sowohl in vivo in einem klassischen eukaryotischen Modellorganismus,  der Bäckerhefe S. cerevisiae (u.a. Durch Herstellung von Zellysaten und Western Blot; Live cell Fluoreszenzmikroskopie; Wachstumstests/chemical biology Experimente), als auch in vitro. Hierfür werden wir die molekulare Maschine rekombinant in E. coli produzieren und mittels Affinitätschromatographie aufreinigen. Anschließend untersuchen wir ihre Funktion in verschiedenen Assays (Oligomerisierungsanalyse durch analytische Gelfiltration; Funktion in der Disassemblierung der ESCRT Maschinerie; ATP Abhängigkeit). Wir verwenden zudem verschiedene Punktmutanten von Vps4 in katalytisch wichtigen Domänen, um mehr über die Funktion dieser molekularen Maschine zu lernen.

Labor-Übung

Schriftlich, Protokoll im Paper Stil

Manuskript mit Arbeitsanleitung für Experimente

Die Vorbesprechung für alle Wahlmodule im Masterstudium findet am 2.10.2023, 16 Uhr in HS F statt.

 Für die Absolvierung des Wahlmoduls ist eine ganztägige Teilnahme an allen drei Teilen (Vorlesung, Seminar, Übung) erforderlich.

KW 3-4