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Institut für Zoologie Institut für Zoologie

Dr. Louise Köblitz Dr. Louise Köblitz

719018

Signaltransduktion - Übungen

UE 2

3

Block

keine Angabe

Deutsch

Nachweis erhöhter Expression des Hypoxia inducible factors (HIF) bei Hypoxie und Akkumulation von HIF durch Inhibition des Proteasomes mit Hilfe eines electromobility shift assays (EMSA)

Der Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) oder band shift assay dient zum Nachweis von DNA- oder RNA-bindenden Proteinen, beispielsweise Transkriptionsfaktoren. Hierbei werden Proteine bzw. Proteingemische mit einem DNA-Fragment bekannter Sequenz inkubiert. Bei der DNA-Sequenz handelt es sich meist um einen regulatorischen Bereich eines Gens (beispielsweise eines Promotors oder Enhancers). Die Probe wird auf ein Polyacrylamid-Gel aufgetragen und mittels eines elektrischen Feldes die Komplexe aus Protein, DNA und evtl. Antikörper entsprechend ihrer Größe aufgetrennt. DNA-Protein-Antikörper-Komplexe wandern langsamer als DNA-Protein-Komplexe, freie DNA wandert am schnellsten. Durch Markierung der DNA (beispielsweise radioaktiv oder mittels eines anderen DNA-Labels, wie DIG oder Biotin) können die Banden im Gel sichtbar gemacht werden.

Protokoll

es sind noch Plätze frei- bei Bedarf bitte melden!!! Termine: Gruppe1: 25.5. - 29.05.09 Gruppe 2 15.6.-19.6.09 Zeit: ca. 11.00 Uhr - 18.00 Uhr
Beginn: 25.5. bzw.15.06.2009

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